Выявление В-лимфоцитов произ-водится на основании экспрессии CD19. CD19 является важнейшим компонентом рецептор-ного аппара-та В-клеток, без которого функцио-нирование данной популя-ции лим-фоцитов невозможно.
Определение общего количества В-лимфоцитов
Анализ образов периферической крови проведен на проточном цитометре Navios 3/10 (Beckman Coulter Inc., USA), полученные результаты обработаны при помощи Kaluza Software 2.1 (Beckman Coulter Inc., USA)
Экспрессия CD19 обнару-живается со стадии про-В-клетки и сохраняется на протяжении всей жизни В-лимфоцита, несколько снижаясь лишь на плазматических клетках. Бо-лее того, этот антиген рассматривает-ся в качестве «линейного» маркера всех В- лимфоцитов. Его экспрессия может быть обнаружена в некотором количестве на фолликулярных дендритных клетках, относитель-ное содержание которых в периферической крови крайне низко. В-лимфоциты играют ведущую роль в формировании эффективно функциони-рующего специфического гуморального иммунитета благодаря своей спо-собности дифференцироваться в плазматические клетки и формированию долгоживущих клеток иммунологической памяти. Поэтому клиническая значимость определения уровня СD19+ лимфоцитов в циркулирующей крови показано при широком круге патологических состояний.
Показатели числа В-клеток
Возраст | Показатель | |
CD19, % | CD19+, абс. | |
1 — 3 мес. | 6 – 31 | 300 – 2000 |
4 — 12 мес. | 11 – 41 | 430 – 3000 |
12 — 24 мес. | 16 — 35 | 720 — 2600 |
2 — 5 лет. | 14 — 33 | 390 — 1400 |
6 — 12 лет. | 13 – 27 | 270 – 860 |
Старше 12 лет. | 10 – 22 | 300 – 570 |
В первую очередь, опре-деление В-клеток важно при диагностике первичных имму-нодефицитов, связанных с наличием агаммаглобулине-мии и дисгаммаглобулинемии. Данный показатель необходим при скрининге и выявлении си-стемных аутоиммунных пато-логических состояний, связан-ных с наличием высокого титра аутореактивных антител в сыворотке крови. Кроме того, анализ содержания В-лимфоцитов в периферической крови значим при инфекционных бактериальных заболе-ваниях и паразитарных инвазиях; злокачественных новообразования, свя-занных с неконтролируемым делением клонов В-лимфоцитов (лимфолейко-зы, лимфомы, миеломная болезнь и т.д.). Увеличение доли этих клеток в рамках лимфоцитарного пула отмечается при некоторых аутоиммунных за-болеваниях, хронических заболеваниях печени, паразитарных и грибковых инфекциях.
Важными показателями являются стадия дифференцировки и активаци-онные маркеры В-лимфоцитов, а также идентификация в периферической крови В1-клеток.
Основные субпопуляции В-клеток (% от В-клеток)
Популяция | Маркеры | Показатель у здорового человека |
В1 — лимфоциты | CD19+CD5+ | 8,0 – 16,0 |
В2 лимфоциты | CD19+CD5- | 78,0 – 90,0 |
В-клетки памяти | CD19+CD27+CD5- | 20,0 – 40,0 |
Наивные В-лимфоциты | CD19+CD27-CD5- | 40,0 – 65,0 |
«naïve» | CD19+ (CD27-IgD+) | 50,0 — 75,0 |
«unsw memory» | CD19+ (CD27+IgD+) | 8,0 — 20,0 |
«sw memory» | CD19+ (CD27+IgD-) | 11,0 — 22,0 |
«DN» | CD19+ (CD27-IgD-) | 2,0 – 6,0 |
«наивные» Bm1 клетки | CD19+ IgD+CD38- | 7,0 – 16,0 |
Bm2 клетки | CD19+ IgD+CD38+ | 45,0 – 70,0 |
Bm2’ клетки | CD19+ IgD+CD38++ | 4,0 – 10,0 |
«Bm3+Bm4» клетки | CD19+ IgD-CD38++ | 0,5 – 1,5 |
eBm5 клетки | CD19+ IgD-CD38+ | 8,0 – 17,0 |
Bm5 клетки | CD19+ IgD-CD38- | 5,0 – 12,0 |
Окраска антителами против IgD и CD38 позволяет идентифицировать следующие популяции В-клеток: «наивные» Bm1 клетки с фенотипом IgD+CD38-, «активированные наивные» Bm2 клетки (IgD+CD38+), Bm2’ – клетки-предшественники В-клеток герминального центра (IgD+CD38++), общая субпопуляция, включающая в себя центробласты и центроциты – так называемые «Bm3+Bm4» клетки (IgD-CD38++), клетки ранней памяти eBm5 (IgD-CD38+) и покоящиеся клетки памяти Bm5 (IgD-CD38-).
Окраска антителами против поверхностных молекул IgD и CD27 поз-воляет отделить группу «наивных» клеток с фенотипом IgD+CD27- от трех разновидностей клеток памяти – клетки памяти с непереключенным классом синтезируемых антител («unswitched» IgD+CD27+), клетки памяти с пере-ключенным классом синтезируемых антител («class-switched» memory cells, IgD-CD27+) и так называемые «дважды-негативные» клетки памяти.
