В настоящее время для локализации NK-клеток в периферической кро-ви наиболее широко используют анализ экспрессии CD16 и CD56, конъюги-рованных с одним и тем же флуорохромом, на CD3-негативных клетках. Нормативные показатели представлены в таблице
Показатели числа NK-клеток
Возраст | Показатель | |
CD16/56, % | CD16/56, абс. | |
1 — 3 мес. | 5,2 — 17,3 | 319 – 1142 |
4 — 12 мес. | 6.2 – 18.2 | 381 – 971 |
1 — 5 лет | 7,5 — 19,5 | 276 — 896 |
6 — 8 лет | 10.6 – 22.4 | 257 – 619 |
9 — 11 лет | 10.6 – 22.4 | 257 – 619 |
Старше 12 лет | 9.9 – 22.9 | 129 – 557 |
Данная комбинация моноклональных антител позволяет локализовать общую популяцию NK-клеток количественно, но не охарактеризовать их от-дельные субпопуляции. Кроме того, у такого подхода есть чисто практическое значение, позволяющее упростить процедуру идентификации NK-клеток в клинической практике. Как известно, НК-клетки спо-собны индуцировать апоптоз в клетках-мишенях, которые ин-фицированы вирусами и дру-гими внутриклеточными анти-генами, или же являются соб-ственными «перерожденными» опухолевыми клетками, а также другие клетки аллогенного и ксеногенного происхождения (реакции отторжения трансплантата, например). Именно поэтому клиническая значимость опреде-ления NK-клеток при реакциях врожденного иммунитета, направленных на элиминацию внутриклеточных патогенов, не вызывает сомнений. Так, увели-чение количества NK-клеток в периферической крови встречается при вирус-ных заболеваниях, повышается при злокачественных новообразованиях и лейкозах, в периоде реконвалесценции, в некоторых случаях увеличение фиксируется при бронхиальной астме, может быть связано с активацией им-мунитета послетрансплантаций. Снижение данного показателя наблюдается при различных врожденных иммунодефицитах, паразитарных инфекциях, аутоиммунных заболеваниях, облучении, лечении цитостатиками и кортико-стероидами, стрессе, дефиците цинка.
NK-клетки.
Необходимо отметить, что NK-лимфоциты представляют собой гете-рогенную популяцию клеток, и уже при иммунофенотипировании общей фракции NK-клеток по маркерам CD16 и CD56 можно выделить их основные субпопуляции. CD16 является низкоаффинным ре-цептором иммуноглобулинов G III типа (FcγRIII), с помощью которого осуществляется механизм клеточной цитотоксичности.
Маркер CD56 (NCAM, Leu-19, NKH-1) является гликопротеином, принадле-жащим к суперсемейству иммуноглобулинов, и принимает участие в реали-зации межклеточных контактов. При этом NK-клетки, активно экспрессиру-ющие CD16 и CD56, определяются как зрелые. NK-клетки с фенотипом CD16–CD56+ проявляют цитотоксическую активность. NK-клетки с феноти-пом CD16+CD56– в ответ на стимуляцию IL-2 начинают секретировать ши-рокий спектр цитокинов, но проявляют слабую цитолитическую активность (цитокинпродуцирующие клетки).
Важным является определение на этих клетках различных маркеров активации, характеризующих их функциональную активность и/или недоста-точность. Среди них важнейшим является выделение субпопуляции цитоли-тических NK-клеток (обладают цитолитической активностью, но секретируют относительно немного цитокинов) и цитокин-продуцирующих натуральных киллеров (выделяют IFN-γ для активации других клеток, но обладают мень-шей цитолитической активностью), а также NKT-клеток, обладающих боль-шей цитотоксичностью.
Экспрессия различных рецепторов позволяет судить о той или иной функции NK-лимфоцитов
Основные популяции NK-клеток
Популяции NK-клеток | Маркеры | Показатель (%) |
Общая популяция | CD3-CD16/CD56+CD19- CD3-CD16+CD56+CD19- | 9,9 –22,9 |
Цитотолитические | CD16hiCD56dim | 0,20–0,56 |
Цитокинпродуцирующие | CD3-CD16-CD56brightCD19- | 0,17–0,53 |
NKT-клетки | CD3+CD16+CD56+CD19- | 0,5 – 6,0 |
Активированные | CD16/56+CD38+ | 1,52–4,18 |
Активно мигрирующие | CD16/CD56+CD11b+ | 0,16–0,47 |
CD16/56+CD62L+ | ||
Конечно-дифференцированные NK-клетки | CD16/56+CD57+ | 0,21–1,82 |
В норме увеличение той или иной субпопуляции клеток свидетельствует о наличии острого воспалительного процесса. При разрешении процесса происходит постепенно снижение показателя до нормального значения. Если количество активированных клеток находится на стабильно повышенном уровне, это может быть признаком хронического воспалительного процесса.
