Бактериологический метод остается одним из ведущих методов при диагностике большинства современных инфекций. Основным этапом бактериологического метода является посев материала на соответствующие питательные среды, с последующим выделением чистой культуры возбудителя, определением его вида, а, следовательно, и установление окончательного диагноза заболевания. Дополнительно возможно определить чувствительность возбудителя к антибиотикам/антимикотикам, антисептикам и бактериофагам.
В зависимости от цели исследования, а также на основании результатов микроскопии, изучения эпидемической ситуации осуществляют выбор одной или нескольких питательных сред для посева биологического материала. В бактериологии и микологии используются среды разнообразные по своему составу, консистенции и функциональному назначению, с веществами, угнетающими рост посторонней микрофлоры и/или с субстратами для выявления от-дельных ферментов. Качество и стандартность питательных сред во многом определяют достоверность результатов бактериологического анализа.
Выделению чистых культур возбудителей способствует использование элективных и селективных сред (обеспечивающих избирательный рост опреде-ленных видов микроорганизмов). Посев материала на дифференциально-диагностические среды позволяет получить чистые культуры возбудителей, подсчитать численность колоний каждого типа. Колонии характеризуют по размеру, форме, контуру края, рельефу, поверхности, цвету, прозрачности структуре и консистенции.
Хромогенные питательные среды позволяют выявить специфические ферментативные активности для разных микроорганизмов. Так, дифференцирующим субстратом в средах Эндо, Плоскирева, Мак-Конки является лактоза, по отношению к которой отличают бесцветные колонии бактерий, не ферментирующие этот углевод (шигеллы, сальмонеллы и др.), от окрашенных колоний, обладающих этой способностью (большинство энтеробактерий).
При использовании хромогенных сред можно дифференцировать различ-ные виды бактерий и грибов только по окраске колоний. При использовании хромогенных сред происходит значительное сокращение времени исследования.
В зависимости от клинической и эпидемиологической потребностей уровень проводимой идентификации может быть различным, чаще всего идентифицируют род и вид возбудителя, проводя биохимические тесты для выявления его родо- и/или видоспецифических ферментов. В ряде случаев, бывает, необхо-дима идентификация до уровня отдельных штаммов, т.е. проведение дифферен-циации и маркировки вариантов одного вида микроорганизма, что особенно важно при выявлении источника заражения и путей распространения возбудителей. При этом, помимо исследования биохимических особенностей штамма проводят типирование с помощью типовых сывороток, бактериофагов и бакте-риоцинов (колицинов, пиоцинов и др.), определяют антибиотикограммы (пока-затели чувствительности микроорганизмов к антибиотикам) и т.д.
Микробиологическая диагностика при гнойно-воспалительных заболева-ниях включает широкий и разнообразный комплекс исследований, что обуслов-лено необходимостью выделения и идентификации всех культур микроорганизмов, присутствующих в образце материала, в т.ч. представителей нормаль-ной микрофлоры человека. Важным аспектом современной диагностики остается оценка этиологической значимости выделенных из материала условно-патогенных микроорганизмов. Первичная клиническая диагностика таких инфекций осложнена тем, что разнообразные по таксономическому происхождению условно-патогенные микроорганизмы способны вызывать сходные комплексы общих и местных поражений. С другой стороны, один и тот же вид возбудителя может обусловливать многообразные по локализации, тяжести и клиническим проявлениям патологического изменения. Если микроорганизм изо-лирован из пробы материала, который в норме стерилен (кровь, цереброспи-нальная жидкость, моча), то он обычно рассматривается как возбудитель заболевания, хотя существует ряд исключений (например, транзиторная бактериемия, контаминация). В этих случаях интерпретация результатов будет зависеть от многих клинических и лабораторных показателей, так на наличие инфекции могут указывать лейкоцитоз, сдвиг лейкоцитарной формулы влево, повышение концентрации С- реактивного белка и т.д.
Когда исследуемый материал (фекалии, мокрота, отделяемое кожи и др.) содержит микроорганизмы, характерные для нормального состояния организма, учитывают качественные и количественные изменения, происходящие в составе микрофлоры, появление нетипичной микрофлоры для данной системы органов или на несвойственном анатомическом участке (нарушение естественного био-топа), повторность ее выделения и т.д.
Определение антибиотикограммы является основным этапом исследова-ния, обеспечивающим выбор оптимального препарата для антибактериальной терапии. Ведущим методом определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам является дискодиффузионный метод, отличающийся простотой выполнения и экономичностью. Метод основан на измерении диаметра зон за-держки роста колоний исследуемого микроорганизма вокруг диска с антибио-тиком. Наиболее точными в количественном отношении являются методы по-следовательных (серийных) разведений антибиотиков в жидкой или плотной питательной среде. Мерой чувствительности микроорганизмов к антибактери-альным препаратам при использовании этих методов служит минимальная по-давляющая концентрация (МПК) – наименьшая концентрация антибиотика, ко-торая подавляет развитие штамма бактерий при стандартных условиях поста-новки опыта и выражается в абсолютных единицах действия (мкг/мл). Знание минимальной подавляющей концентрации позволяет на основании сопоставле-ния цифровых значений степени чувствительности клинических штаммов бак-терий со средними концентрациями антибактериального препарата в организме выбрать оптимальный препарат.
Одной из задач бактериологического исследования является оценка соче-танного воздействия препаратов на выделенную культуру возбудителя. Для это-го диски, пропитанные антибиотиками, наносят на чашки Петри, засеянные ис-следуемой культурой возбудителя, на расстоянии равном или несколько боль-шем, чем сумма радиусов зон подавления его роста. Эффект может быть разно-образным: индифферентным (независимым), если после инкубации имеются две независимые зоны подавления роста возбудителя вокруг каждого из дисков; си-нергидным (потенцированным) или аддитивным (суммарным) при слиянии зон подавления роста; антагонистическим, когда зоны подавления роста уменьшаются в части, обращенной друг к другу.
Применяют также диски, пропитанные одновременно двумя препаратами. При этом для сравнения зон подавления роста возбудителя одновременно ис-пользуют диски, содержащие по одному из данных препаратов. Если зона во-круг двойного диска больше, то говорят об аддитивном или синергидном эффекте, если меньше – об антагонизме.
Определение антимикробной активности биологических жидкостей орга-низма (сыворотки крови, мочи, желчи, цереброспинальной жидкости, различных экссудатов и др.) проводят до и после введения химиотерапевтического препарата, что позволяет получать более надежные данные о его терапевтических возможностях в условиях, приближенных к естественным. Так, задержка развития возбудителя в моче или желчи (при разведении в 4 – 8 раз), получен-ных от больного спустя 2 – 4 ч. после начала терапии, указывает на эффективность химиотерапевтического препарата.
При многих инфекционных болезнях лаборатория сообщает окончательный ответ по быстрорастущим микробам через 2 – 4 дня, при туберкулезе, бруцеллезе – через 3 – 4 нед, рост микроскопических грибов регистрируется от 5 – 7 дней и до 21 дня. Потребность в сокращении сроков получения окончательных результатов стимулировала разработку экспресс-методов, позволяющих регистрировать результаты через 3 – 6 ч., то есть в день проведения исследования, что чрезвычайно важно в экстренных клинических ситуациях.